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EHA105（pSoup）感受態(tài)細(xì)胞

EHA105（pSoup）感受態(tài)細(xì)胞

簡要描述：EHA105（pSoup）感受態(tài)細(xì)胞
EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif，pSoup即為EHA105 （pSoup）菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時賦予該菌株四環(huán)素（tet）抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

更新時間：2022-01-21

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

瀏覽次數(shù)：1060

詳情介紹
品牌其他品牌貨號BFNC86099
規(guī)格10x100ul/50x100ul/100x100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途僅用于科研應(yīng)用領(lǐng)域醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)

EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞



產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86099-01(10×100ul)/BFNC86099-02(50×100ul) /BFNC86099-03(100×100ul)

EHA105(pSoup)：                                                     100μl/支
pGs2（control vector，10ng/μl )                                    10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（12個月）



基因型

C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine (pSoup-tetR)






產(chǎn)品說明


EHA105菌株由EHA101菌株改造而來，為C58型背景，核基因中含有篩選標(biāo)簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉(zhuǎn)化操作，此菌株攜帶一無自身轉(zhuǎn)運(yùn)功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉(zhuǎn)移功能被破壞，但可以幫助轉(zhuǎn)入的雙元載體T-DNA順利轉(zhuǎn)移)。在EHA105菌株中轉(zhuǎn)入help質(zhì)粒：pSoup即為EHA105 (pSoup)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中復(fù)制，同時賦予該菌株四環(huán)素（tet）抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉(zhuǎn)基因操作。

青旗生物生產(chǎn)的EHA105(pSoup)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。




操作方法

1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2. 每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉(zhuǎn)化效率較高，*使用盡量做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量），用手bo打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基，于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天

（當(dāng)平板只含有50 μg/ml kan 時，28℃培養(yǎng)48 h即可；平板中同時加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時，需28℃培養(yǎng)60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90 h）。





注意事項

1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染，轉(zhuǎn)化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。

2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量，本公司生產(chǎn)的EHA105(pSoup)化學(xué)轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞具有四環(huán)素抗性，但在轉(zhuǎn)入目標(biāo)質(zhì)粒涂板篩選陽性克隆時，只需加入目標(biāo)質(zhì)?？剐缘目股兀患铀沫h(huán)素。

3. 平板上陽性克隆密度過大時，由于營養(yǎng)不足，陽性克隆生長變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應(yīng)減少質(zhì)粒用量。

4. 利福平濃度不應(yīng)高于25 μg/ml，過高的利福平濃度不利于農(nóng)桿菌生長，會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。

5. 培養(yǎng)基中加入利福平的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌；根據(jù)所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈霉素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作，培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)。



EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞



備注


1、農(nóng)桿菌相關(guān)抗生素配方：

抗生素

配方

原液

工作液

羧芐青霉素（carb）

雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

硫酸卡那霉素（kan）

雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌

50 mg/ml

50 μg/ml

鏈霉素（strep）

雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌

10 mg/ml

50 μg/ml

利福平（rif）

DMSO溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌

10 mg/ml

20 μg/ml

慶大霉素（gent）

雙蒸水溶解，0.22 μm濾膜過濾除菌

20 mg/ml

40 μg/ml


2、常用農(nóng)桿菌抗性：（R：抗；S：敏感。）

農(nóng)桿菌菌株

羧芐青霉素(carb)

鏈霉素(strep)

利福平(rif)

慶大霉素(gent)

硫酸卡那霉素(kan)

AGL-1

R

S

R

S

S

EHA101

S

S

R

S

R

EHA105

S

S

R

S

S

LBA4404

S

R

R

S

S

GV3101

S

S

R

R

S


3、LB及YEB配方：

component

LB(液體)/L

LB(固體)/L

component

YEB(液體)/L

YEB(固體)/L

Tryptone

10 g

10 g

Tryptone

5 g

5 g

Yeast extract

5 g

5 g

Yeast extract

1 g

1 g

NaCl

10 g

10 g

牛肉浸膏

5 g

5 g

NaOH

調(diào)PH到7.0

調(diào)PH到7.0

蔗糖

5 g

5 g

Agar

－

15 g

MgSO4*7H2O

0.49 g

0.49 g




NaOH

調(diào)PH到7.0

調(diào)PH到7.0




Agar

－

15 g




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